外泌體是大小30-200nm的膜性小囊泡,在血液、尿液、羊水、惡性腫瘤、腹水等體液及細胞培養上清中均存在。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質和功能性的RNA等生物活性分子,和體內多種疾病的發生和發展密切相關。因外泌體攜帶重要的生物信息,使它具有很重要的潛在應用價值,一方面外泌體可以作為疾病的診斷標志物,另一方面外泌體可以作為一種治療手段,未來有望通過外泌體載藥用于疾病的治療。正因如此,外泌體的研究持續高熱度。
外泌體研究的首要任務是對外泌體進行提取純化,提取外泌體的方法很多,那哪種方法提取外泌體更好呢?
一、超速離心方法
原理:基于不同顆粒密度、沉降系數不同,利用低速離心和高速離心交替進行的方法分離外泌體顆粒。
優點:文獻引用較多,如實驗室設備條件滿足,可省成本
缺點:需要大型離心機,高離心力會損傷外泌體;操作耗時;步驟繁瑣;產量不穩定(受轉子、轉速、起始樣本量等多因素影響);起始樣本量需求高
二、密度梯度離心
原理:在超速離心力的作用下,使氯化銫或蔗糖等介質形成密度階層,通過密度梯度離心,讓外泌體沉降在某一個密度范圍。
優點:純度相對較高
缺點:操作非常復雜且耗時,需要大型離心機
三、免疫磁珠法
表面包被標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后,特異性識別外泌體特異性標志物(CD9、CD81、CD63等)。
優點:操作簡單、純度較高
缺點:成本高;產量少,只能收集一類exosome,損失多;步驟繁瑣;種屬特異性限制;需要磁力架和冷凍離心機等儀器
四、PEG沉淀法
聚乙二醇(PEG)可與水分子形成網狀結構,捕獲一定粒徑大小的外泌體顆粒。
優點:操作簡單;不需要大型離心機等儀器
缺點:市面上品牌眾多,大多可靠性差;發表文章易受質疑等。